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色譜柱的死體積是什么,怎么計算

更新時間:2021-04-08點擊次數:11170
   色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球(包括離子交換樹脂)、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,柱效理論值可達5~16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數的柱效。

 


   死體積狹義上指的是色譜柱中未被固定相占據的空隙體積,即色譜柱內流動相的體積。廣義上的死體積是指進樣位置(進樣口)到檢測位置(檢測器流通池)這一段的體積(PS:除去色譜柱中填料體積),一旦色譜柱連接,這段體積是不變的(死的)。

   對于HPLC來說,該如何計算死體積呢。 
   死體(ti)積(ji)(ji)(dead volume,V0)——由進樣(yang)器進樣(yang)口(kou)到檢(jian)測器流(liu)動池(chi)未(wei)被(bei)固定相所占據的(de)空間。它包括4部(bu)(bu)分(fen):進樣(yang)器至色譜柱(zhu)管路(lu)體(ti)積(ji)(ji)、柱(zhu)內固定相顆(ke)粒間隙(被(bei)流(liu)動相占據,Vm)、柱(zhu)出口(kou)管路(lu)體(ti)積(ji)(ji)、檢(jian)測器流(liu)動池(chi)體(ti)積(ji)(ji)。其中只有(you)Vm參與色譜平(ping)衡過(guo)程,其它3部(bu)(bu)分(fen)只起峰擴(kuo)展(zhan)作(zuo)用(yong)。為防止峰擴(kuo)展(zhan),這3部(bu)(bu)分(fen)體(ti)積(ji)(ji)應盡量減小。

   死時間(jian)(dead time,t0)——不保留(liu)組分的保留(liu)時間(jian)。即流動相(溶(rong)劑)通過(guo)色(se)譜柱的時間(jian)。

   測(ce)量(liang)系統死體積通(tong)常(chang)需(xu)要通(tong)過(guo)實驗進行測(ce)量(liang),常(chang)用方(fang)法是(shi)通(tong)過(guo)進一(yi)針(zhen)和色(se)(se)譜柱固定相(xiang)沒有(you)任(ren)何(he)作用的(de)特殊溶液(方(fang)法中會有(you)規定,例如:尿嘧(mi)啶,少量(liang)NaNO3或甲醇(chun)溶于流動相(xiang)得到的(de)溶液,也有(you)直(zhi)接用100%色(se)(se)譜純甲醇(chun)進樣的(de)情形)時,就(jiu)會得到一(yi)個(ge)色(se)(se)譜峰,由此峰可以測(ce)得死時間(t0),這(zhe)就(jiu)是(shi)t0的(de)實測(ce)結(jie)果。

   然后通過計(ji)算(suan)得到系統死體積(ji):死(si)體積(ji)(V0) = 死(si)時間(jian)t0×流(liu)(liu)動相的流(liu)(liu)速(su)F。