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當前位置:首頁技術文章如何正(zheng)確配制和準備流動相?

如何正確配制和準備流動相?

更新時間:2012-11-24點擊次數:14794

1、溶劑的純化

   在液相色譜儀分(fen)(fen)析(xi)中(zhong),正相(xiang)色(se)(se)譜(pu)(pu)以(yi)已烷作為流動相(xiang)的(de)(de)主(zhu)體(ti),二(er)氯(lv)甲(jia)(jia)烷、氯(lv)仿、乙(yi)醚作為改性(xing)劑(ji)(ji);反相(xiang)色(se)(se)譜(pu)(pu)以(yi)水(shui)作為主(zhu)體(ti),以(yi)甲(jia)(jia)醇、乙(yi)睛(jing)、四(si)氫吠喃(nan)作為改性(xing)劑(ji)(ji)。HPLC分(fen)(fen)析(xi)均應使用HPLC級純(chun)度(du)的(de)(de)溶(rong)劑(ji)(ji),AR級的(de)(de)溶(rong)劑(ji)(ji)可能會由于(yu)雜質的(de)(de)存在而出現鬼峰。正相(xiang)色(se)(se)譜(pu)(pu)分(fen)(fen)析(xi)中(zhong)使用的(de)(de)己烷、二(er)氯(lv)甲(jia)(jia)烷、氯(lv)仿、乙(yi)醚中(zhong)經常(chang)含有(you)微(wei)量的(de)(de)水(shui)分(fen)(fen),這會改變液固色(se)(se)譜(pu)(pu)柱的(de)(de)分(fen)(fen)離(li)(li)性(xing)能,使用前應用球(qiu)形(xing)分(fen)(fen)子(zi)篩柱脫(tuo)(tuo)去(qu)水(shui)分(fen)(fen)。反相(xiang)色(se)(se)譜(pu)(pu)分(fen)(fen)析(xi)中(zhong)使用的(de)(de)甲(jia)(jia)醇、乙(yi)睛(jing)、四(si)氫吠喃(nan),不必(bi)脫(tuo)(tuo)除微(wei)量水(shui),但甲(jia)(jia)醇、乙(yi)睛(jing)等使用前經硅膠柱凈化,去(qu)除具(ju)有(you)紫外吸收(shou)的(de)(de)雜質。要保(bao)證配制流動相(xiang)用水(shui)的(de)(de)純(chun)度(du)足(zu)夠高。由于(yu)去(qu)離(li)(li)子(zi)水(shui)通常(chang)含有(you)一些(xie)有(you)機(ji)物,所以(yi)不適合用于(yu)HPLc分(fen)(fen)析(xi)用,使用超純(chun)水(shui)(電(dian)阻率18Mfl.cm)。如果條件有(you)限,可將去(qu)離(li)(li)子(zi)水(shui)再次(ci)蒸餾,現用現蒸,保(bao)持新鮮(xian),還能脫(tuo)(tuo)去(qu)CO2,使用效(xiao)果也(ye)不錯(cuo)。

2、緩沖溶液

   有(you)些分(fen)(fen)析需要用到緩沖鹽的(de)流動(dong)相,配(pei)制時(shi)(shi)鹽試(shi)劑要用AR級(ji)以上(shang)、沒有(you)污(wu)染、過(guo)期;現用現配(pei),不(bu)要儲存(cun)時(shi)(shi)間過(guo)長,避免pH值發(fa)生變化和(he)成分(fen)(fen)分(fen)(fen)解,影響(xiang)色譜分(fen)(fen)離的(de)效果。緩沖鹽的(de)流動(dong)相能(neng)在(zai)實驗(yan)室自己配(pei)制,商品化的(de)流動(dong)相可(ke)能(neng)會添加有(you)硫代*穩定劑,會影響(xiang)緩沖液的(de)光學和(he)色譜性(xing)能(neng)。

3、過濾

   無論是(shi)(shi)有機水(shui)溶(rong)液還是(shi)(shi)緩(huan)沖鹽溶(rong)液的流(liu)動相,配好后(hou)(hou)都要(yao)通過(guo)0.45卜(bu)m濾(lv)膜過(guo)濾(lv)后(hou)(hou)再(zai)上機使用,這(zhe)樣能(neng)夠有效(xiao)防(fang)止由于(yu)(yu)微(wei)粒的存在使流(liu)路管道堵塞。過(guo)濾(lv)后(hou)(hou)應把溶(rong)劑放在密閉容(rong)器(qi)中,以防(fang)止被重新污染(ran)。過(guo)濾(lv)后(hou)(hou)的溶(rong)液既可(ke)用于(yu)(yu)色譜(pu)分析,也可(ke)用于(yu)(yu)清(qing)洗諸如泵(beng)頭、柱塞桿、單(dan)向閥(fa)和密封圈等儀器(qi)部件,保持輸(shu)液泵(beng)的性能(neng)良好。

4、脫氣

   所(suo)有(you)的(de)(de)(de)流動相在(zai)進(jin)人(ren)HPLC系統(tong)之前(qian)都應該首先脫(tuo)氣(qi)(qi)(qi)(即使儀器上(shang)有(you)在(zai)線(xian)脫(tuo)氣(qi)(qi)(qi)),因為沒有(you)脫(tuo)氣(qi)(qi)(qi)的(de)(de)(de)流動相進(jin)人(ren)到高壓(ya)系統(tong)后存在(zai)的(de)(de)(de)氣(qi)(qi)(qi)泡會導致系統(tong)的(de)(de)(de)流速和壓(ya)力(li)不穩定,出現鬼峰等(deng)間(jian)題。從溶液中排除(chu)氣(qi)(qi)(qi)泡的(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)主要有(you):真空(kong)脫(tuo)氣(qi)(qi)(qi)、氦(hai)氣(qi)(qi)(qi)脫(tuo)氣(qi)(qi)(qi)和超聲(sheng)波脫(tuo)氣(qi)(qi)(qi)實際工(gong)作(zuo)中真空(kong)抽濾的(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)很(hen)有(you)效,它(ta)既能(neng)脫(tuo)氣(qi)(qi)(qi)又能(neng)過濾,但(dan)必須在(zai)上(shang)機前(qian)完成。在(zai)線(xian)連續(xu)脫(tuo)氣(qi)(qi)(qi)可以防止氣(qi)(qi)(qi)體隨溫度的(de)(de)(de)變化重新溶解在(zai)溶劑中。


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